Allontanandoci dal Castello del Calcione il percorso prosegue verso il borgo di Lucignano per un tratto breve di 10 km e prevalentemente in una zona collinare con scarso traffico.
Si scende dal colle della Località Il Calcione e si continua sempre a dritto in direzione Lucignano per una strada mista asfalto/strada bianca. In località Campoleone il percorso svolta a sinistra in via Mazzini, permettendovi di salire lentamente verso il centro storico di Lucignano lungo una strada panoramica costeggiata dal verde e dai campi coltivati. Al termine di via Mazzini vi ritroverete lo stadio sulla destra e per raggiungere il centro storico di Lucignano basterà continuare a dritto per 100 metri e svoltare a sinistra. Questo borgo dalla caratteristica pianta ad anelli concentrici vanta origini etrusche, come dimostrano i vari reperti archeologici e le necropoli rinvenute intorno al paese. L’impianto medievale rimasto intatto per secoli gli conferisce un fascino unico che gli è valso vari riconoscimenti, come la Bandiera Arancione del Touring Club italiano e quello dell’associazione “Borghi più belli d’Italia”. Nonostante tutto il centro storico possa essere considerato un punto di interesse di per sé, Piazza del Tribunale offre uno scorcio incantevole di questo borgo e sulla stessa piazza si può anche trovare il Palazzo Comunale, sede inoltre del Museo Comunale. Qui si possono ammirare dipinti, oreficerie, affreschi e arredi sacri del XIII e del XVIII secolo, ma soprattutto l’Albero d’Oro o “Albero della Vita”: un reliquiario in stile arboreo alto circa 2,60 metri realizzato in argento, rame dorato e smalti e decorato con piccole teche, medaglioni e miniature, magnifico esempio di oreficeria aretino-senese che è considerato anche un portafortuna per coppie ed innamorati.